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當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章細(xì)胞凍存&細(xì)胞復(fù)蘇

細(xì)胞凍存&細(xì)胞復(fù)蘇

更新時間:2022-04-08點(diǎn)擊次數(shù):1477
03細(xì)胞凍存:


試劑:凍存液,PBS,胰酶,含血清的培養(yǎng)基;
流程:要凍存,先配置凍存液,凍存液包含了:DMSO:防止在低溫(零度以下至-196℃)保存細(xì)胞時,細(xì)胞內(nèi)液會形成冰晶,滲透壓會發(fā)生改變,細(xì)胞結(jié)構(gòu)會出現(xiàn)紊亂,會導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時,一般需與血清一起配置:因?yàn)閮烧呋ト跁r,會散發(fā)熱量,所以凍存液需提前制備。
因?yàn)榧?xì)胞太多了,需要凍存,所以要先看一看,吸一吸,洗一洗,分一分,中和一下,吹打制成細(xì)胞懸液,離心,吸掉上清液,加入凍存液,輕輕吹吸均勻,每管等量1ml裝入凍存管,4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜,最后放入液氮罐。
04細(xì)胞復(fù)蘇:
試劑:含血清的培養(yǎng)基;
流程:從液氮中取出凍存管,迅速(小于3min)置于37℃水浴鍋中,解凍時,邊晃動邊觀察,當(dāng)看到只有一小塊冰存在時,即可從水浴鍋中取出,打開凍存管,迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中,輕輕混勻,1000r/min,離心五分鐘,吸掉上清液,沉淀中加入適量培養(yǎng)液,放入孵箱中,培養(yǎng)。還有就是:復(fù)蘇的細(xì)胞,需要在24小時后,換一次培養(yǎng)液。



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