何為細胞老化？

1882年，德國生物學(xué)家Weismann曾大膽預(yù)測“在細胞水平存在老化現(xiàn)象"。他推測：機體的壽命限制受控于體細胞的分裂能力；在遺傳進化中，不同物種的體細胞獲得了不同分裂的潛能，從而決定了不同物種的壽命長短。

20世紀50年代，Swin和他的同事利用原代細胞體外培養(yǎng)試驗證明了來源于不同物種的纖維細胞均不具備無限分裂的潛能。取得突破性進展的還是Hayflflick和Moorhead，他們做了更系統(tǒng)更細致的觀察和描述，他們對25株人成纖維細胞進行原代培養(yǎng)，在這個過程中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過約50次傳代之后，所有細胞出現(xiàn)功能退化，并且喪失分裂能力的現(xiàn)象。此后人們將這一現(xiàn)象稱之為“Hayflflick極限"或者自發(fā)性老化。之后也有事實證明，細胞老化并不是體外培養(yǎng)所導(dǎo)致，細胞在體內(nèi)也會隨著年齡的增長，逐步走向老化。

※細胞老化最開始的現(xiàn)象通常為細胞內(nèi)部會出現(xiàn)空泡（可能是凋亡小體），也可能會出現(xiàn)黑點，大多沿細胞周邊排布，內(nèi)部中間也可能會顯現(xiàn)一些，但相對周邊較少；

※老化的細胞會出現(xiàn)細胞體積縮小，胞質(zhì)濃縮，胞膜起泡，皺縮等現(xiàn)象；

※老化以后的細胞會出現(xiàn)立體感慢慢消失，開始成扁平狀，細胞與細胞之間的間隔減小或混在一起，細胞不再是梭形，而會成為各種不規(guī)則形狀；

※細胞折光性變差，鏡下可見細胞“變薄"，做轉(zhuǎn)染實驗時，細胞死亡率會較高，但培養(yǎng)液不會發(fā)生迅速變黃的現(xiàn)象，仍清亮。（如果是細菌污染的話，一般會出現(xiàn)培養(yǎng)液的迅速變黃，混濁，鏡下可見大量繁殖的細菌；若是支原體污染的話，細胞也會失去正常形態(tài)，會有細胞的死亡）；

※細胞的貼壁性減弱，開始有細胞漂浮在培養(yǎng)液中；

※老化的細胞表面分泌物會增多，細胞表面的純凈度越來越低；

※分裂的細胞數(shù)量明顯的減少，同時細胞的增殖速度也會大大下降；

細胞開始長角分化。

細胞培養(yǎng)中如何預(yù)防老化？

防止細胞老化最主要還是要做到勤觀察、勤換液、勤傳代、勤保種，特別是傳代，不能等細胞太密了之后傳，一般細胞建議長到70％融合度傳代最好；

換培養(yǎng)液應(yīng)該根據(jù)自己細胞消耗培養(yǎng)基的情況來確定是否該換。如果感覺時間不好把握的話就多培養(yǎng)幾瓶細胞，在不同的時間換液，最后再來比較下，看什么時候換液好，得出自己的結(jié)論；

選擇正確的血清與培養(yǎng)基：細胞對血清特別敏感，直接影響細胞的生長。一定要選擇適合的血清不然就會因營養(yǎng)物質(zhì)不協(xié)調(diào)而導(dǎo)致細胞老化；

在間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)時必然要進行消化，但是消化對細胞的表面蛋白質(zhì)有很強的破壞作用，因此不能長時間進行消化并且在選擇消化酶時也要選擇較為合適的pH和濃度，不然就會使細胞老化或者分化；

在開始養(yǎng)細胞并傳代時，也要特別注意凍存細胞，以保持細胞有種子庫存在，可以有效避免細胞損傷。

雖然，老化細胞不會立即死亡，但其基因表達會發(fā)生變化，如果細胞老化現(xiàn)象嚴重，建議從種子庫或工作庫重新復(fù)蘇細胞。