細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)死亡的原因及解決方法？

可能原因： 1、培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2； 2、培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大； 3、細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷； 4、培養(yǎng)液滲透壓不正確； 5、培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。 解決方法： 1、檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2； 2、檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度； 3、取新的保存細(xì)胞種； 4、檢測培養(yǎng)液滲透壓； 5、換入新鮮培養(yǎng)液。

細(xì)胞培養(yǎng)生長不好的原因及解決方法？

可能原因： 1、細(xì)胞本身的狀態(tài) 細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化； 細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢； 細(xì)胞傳代時間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長； 胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細(xì)胞死亡；時間過短，細(xì)胞未wan全分離而成團，細(xì)胞死亡； 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。 2、污染 支原體污染； 霉菌污染。 3、培養(yǎng)基或血清 更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證； 選擇的培養(yǎng)基是否合適； 培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。 4、培養(yǎng)環(huán)境 CO2供應(yīng)是否正常； 培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。 解決方法： 根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的。解決方案 1、注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等； 2、避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）； 3、要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過驗證； 4、注意實驗室的環(huán)境。

細(xì)胞培養(yǎng)生長緩慢的原因及解決方法？

1、由于更換不同培養(yǎng)液或血清； 2、培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞； 3、培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染； 4、試劑保存不當(dāng)； 5、接種細(xì)胞起始濃度太低； 6、細(xì)胞已老化； 7、支原體污染 。 解決方法： 1、比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液； 2、換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子； 3、用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物； 4、血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清wan全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完； 1、增加接種細(xì)胞起始濃度； 2、換用新的保種細(xì)胞； 3、分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

懸浮細(xì)胞成簇或者成團的原因及解決方法?

可能原因： 1、培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ； 2、支原體污染； 3、蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解； 4、DNA污染 。 解決方法： 1、用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液； 2、分離培養(yǎng)物，檢測支原體； 3、用DNaseI處理細(xì)胞。