產(chǎn)品名稱：小鼠胚胎成骨細胞前體細胞mc3t3 e1    

細胞規(guī)格：1-3×10^6細胞量

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

培養(yǎng)液：DMEM+10% FBS

運輸方式：常溫順豐運輸和干冰順豐運輸

貨 期：復(fù)蘇細胞需要1-2周，凍存細胞的需要3-5天（特殊情況會有說明）

質(zhì) 控：無支原體、無污染、符合標(biāo)準(zhǔn)

研究范圍：僅供科研使用

小鼠胚胎成骨細胞前體細胞mc3t3 e1     

我司主要經(jīng)營產(chǎn)品是國內(nèi)傳代細胞和細胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購！

我司以客戶為核心，以產(chǎn)品質(zhì)量求生存，以售后服務(wù)求信譽。我們通過不斷改進來提高效率，絕不以犧牲品質(zhì)作為代價。“誠信、創(chuàng)新、嚴謹、專業(yè)”愿以飽滿的熱情期待各界朋友攜手合作，共創(chuàng)輝煌！

細胞培養(yǎng)步驟

1. 剪切組織　先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術(shù)鑷去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后，用手術(shù)刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復(fù)剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm³大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當(dāng)?shù)木彌_液再清洗一次。

2. 消化分離　消化分離的目的是將細小的組織塊消化分離成細胞團或分散的單個細胞，以利于進一步的培養(yǎng)，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。

3. 培養(yǎng)　細胞懸液用計數(shù)板進行細胞計數(shù)。用培養(yǎng)液將細胞數(shù)調(diào)整為（2～5）×10⁵ 細胞／毫升，或?qū)嶒炈杳芏?，分裝于培養(yǎng)瓶中，使細胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，5％CO2，37℃靜置培養(yǎng)。一般3～5d，原代培養(yǎng)細胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長，可補加原培養(yǎng)液量1／2的新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d后換液，一般7～14d可以長滿瓶壁，進行傳代。

細胞培養(yǎng)注意事項

（1）無菌操作：細菌或霉菌污染是培養(yǎng)失敗的常見原因，必須加強各個環(huán)節(jié)的無菌操作觀念，以預(yù)防為主，一旦污染，一般很難消除。

（2）培養(yǎng)液：所用的培養(yǎng)液必須滿足細胞生存和生長的必要條件。由于細胞來源的動物種類、組織類型不同，對培養(yǎng)液的要求有一定的差異，必要時可用預(yù)實驗的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）血清：血清對于維持培養(yǎng)細胞的生存和促進細胞增殖起著關(guān)鍵性作用?？蛇x擇多種不同批號的血清進行小樣分析。一旦確定某一廠家的某一批號血清后，就保持應(yīng)用至實驗完成。

（4）膠原酶溶液：必須新鮮配制，貯存時間過長(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導(dǎo)致消化時間過長，細胞損傷增加。

（5）L-谷氨酰胺：幾乎所有細胞對谷氨酰胺都有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時，細胞會因生長不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，加有谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱貯存兩周以上時，就應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。

（6）靜置培養(yǎng)：原代細胞在消化分離后，置于CO2培養(yǎng)箱的頭24～48h (必要時72h)內(nèi)，應(yīng)處于靜置狀態(tài)，切忌不時地取出培養(yǎng)瓶觀察生長狀況，這將使原代分離細胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應(yīng)注意。不必擔(dān)心培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分會消耗光，在細胞增殖之前對營養(yǎng)的要求并不大。原代培養(yǎng)初期僅加一薄層培養(yǎng)液的目的也在于有利于細胞貼壁伸展。

細胞培養(yǎng)實驗中*的除了培養(yǎng)基，胰酶也是非常重要的一個角色，雖然細胞培養(yǎng)試驗基本技術(shù)大同小異，每種細胞的培養(yǎng)條件各不相同，但是，在細胞傳代過程中都少不了這個步驟—胰酶消化。

細胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢？胰酶的作用是什么？

胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時，細胞由于自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。

使用胎牛血清培養(yǎng)細胞，在使用胰酶消化時發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程，這是什么原因？

血清終止的原理其實是競爭抑制，就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合，使胰酶失去消化細胞蛋白的機會。

為什么使用了胰蛋白酶消化，細胞還是成團的，這可能是什么原因?qū)е碌模?/span>

消化時間不夠 ② 吹打力度不夠 ③ 胰酶消化液濃度不夠 ④ 細胞密度過高之后才消化傳代 ⑤ 胰酶存儲不當(dāng)，或者使用了過期胰酶

胰酶分裝凍存時要注意什么？

胰酶分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會降低消化效果并增大污染的可能性。

怎么才能判斷胰酶消化*？

注意：不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。

一般肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙狀移動就可以了，就應(yīng)該停止消化。

胰酶適用于哪些細胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？

胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。

胰酶中的酚紅有哪些作用？

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH指示劑，中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明：酚紅可以模擬固醇類激素（特別是雌激素）的作用。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細胞尤其是哺乳類細胞時，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，在做流式細胞檢測時，也會使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者胰酶。

在做細胞凋亡檢測時，細胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化？

Annexin V（膜聯(lián)蛋白）是Ca2+依賴的蛋白，EDTA會螯合Ca2+從而影響Annexin V，進而影響結(jié)果，因此需選用不含EDTA的胰酶。建議放入培養(yǎng)箱中進行消化，時間可以長一點。隨時觀察細胞情況，避免消化過度；也可使用細胞刮刀將細胞刮下，后用槍吹勻，比消化簡單，還可避免使用胰酶帶來的傷害。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結(jié)腸癌細胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細胞株

3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細胞

NIH/3T3小鼠胚胎細胞

Raw264.7小鼠單核巨噬白血病細胞

B16-F10小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細胞

B16 小鼠黑色素瘤細胞

CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細胞

SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細胞

F9 小鼠畸胎瘤細胞

MLE-12 小鼠肺泡上皮細胞

Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細胞

BV2 小鼠小膠質(zhì)細胞  

DC2.4小鼠樹突狀細胞

U14 小鼠子宮頸癌細胞

M-NFS-60小鼠骨髓性白血病細胞

mMSC小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞

HL-1小鼠心肌細胞

TM3 小鼠睪丸間質(zhì)細胞

k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨細胞

mc3t3 e1小鼠胚胎成骨細胞前體細胞

hepa1-6 小鼠肝癌細胞

SP2/0小鼠骨髓瘤細胞

HT22小鼠海馬神經(jīng)元細胞系

MC38小鼠結(jié)腸癌細胞

mpc5小鼠足細胞

4T1 小鼠乳腺癌細胞

ANA-1小鼠巨噬細胞

TM4 小鼠睪丸支持細胞

STO 小鼠胚胎成纖維細胞

bend.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞

J774A.1小鼠單核巨噬細胞

H9C2 大鼠心肌細胞

PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)

PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)

AR42J 大鼠胰腺外分泌細胞

IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細胞

RT4-D6P2T 大鼠神經(jīng)鞘瘤細胞

INS-1 大鼠胰島細胞瘤細胞

NRK-52E 大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細胞

BHK-21 倉鼠腎成纖維細胞

PK-15 豬腎細胞

Duckembyro 鴨胚胎成纖維細胞

vero 綠猴腎細胞

Hep3B人肝癌細胞

HPAC人胰腺癌細胞

HT-1376 人膀胱癌細胞

JAR 人胎盤絨毛癌細胞

KNS-89 人腦膠質(zhì)細胞瘤細胞

LN229 人膠質(zhì)瘤細胞

LNCaP clone FGC 人前列腺癌細胞

MDA-KB2 人乳腺細胞

MDA-MB-361 人乳腺癌細胞

MET-5A 人膜間皮細胞

MGC-803 人胃癌細胞

NCI-H1650 人肺支氣管癌細胞

RT4 人膀胱移行細胞乳頭瘤

SK-N-MC 人神經(jīng)上皮瘤細胞

SK-N-SH 人神經(jīng)母細胞瘤細胞

SW982 人滑膜肉瘤細胞

T98G 人膠質(zhì)母細胞瘤

U251MG(KO) 人類星形膠質(zhì)細胞瘤細胞

U266 人骨髓瘤細胞

VCAP 人前列腺癌細胞

hTERT-HPNE 人胰腺導(dǎo)管細胞

ES-2 人卵巢透明細胞癌細胞

NCI-H1650人非小細胞肺癌細胞

H460 人大細胞肺癌細胞

HACAT 人永生化角質(zhì)形成細胞

HCT116 人結(jié)腸癌細胞

HEK293 人胚腎細胞

HEPG2 人肝癌細胞

HGC27 人胃癌細胞(未分化)

HT-29 人結(jié)腸癌細胞

HUVEC 人臍靜脈內(nèi)皮細胞

KYSE150人食道癌細胞

L02(HL7702)人正常肝細胞  

LOVO 人結(jié)腸癌細胞

MCF-10A人正常乳腺上皮細胞

MCF7人乳腺癌細胞

LX-2 人肝星狀細胞

MDA-MB-468人乳腺癌細胞

Hyclone胎牛血清 Sv30087.01

Hyclone胎牛血清 Sv30087.02

Hyclone胎牛血清 SH30084.03

Hyclone優(yōu)等胎牛血清 SH30406.02

Hyclone優(yōu)等胎牛血清 SH30406.05

Hyclone特級胎牛血清 SH30396.03

Hyclone特級胎牛血清 SH30070.03

Hyclone特級胎牛血清 SH30070.03E

Hyclone胎牛血清 SH30370.03

活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03

活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活 SH30068.03HI

馬血清SH30074.03

烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03

Hyclone胎牛血清SH30071.03

Hyclone胎牛血清SV30160.03

胎牛血清FBS SFBS

新生牛血清 SNCS

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101

PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS

BI ES級別胎牛血清 04-002-1A

BI 間充質(zhì)胎牛血清 04-400-1A

Corning胎牛血清 35-076-CV

PAN胎牛血清FBS P30-3302

PAN胎牛血清FBS ST30-3302

PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602

PAN胎牛血清FBS Plus ST30-3302P

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108

Gemini特級胎牛血清 100-500

Gemini科研用人AB血清100-512

TCB胎牛血清 101ZC

Sigma 特級胎牛血清 F2442

Sigma正常人AB血清 H4522

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清10270106、10099-141、10091-148、10099-133、10100-147、16010159、A31608-02、16050-122、30067334、10437-028等優(yōu)質(zhì)胎牛血清

雙抗 15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT

DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培養(yǎng)基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培養(yǎng)基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS緩沖液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02